血中游离原卟啉的荧光光度测定方法

本标准用于正常人和接触铅的工人血液中游离原卟啉（FEP）的荧光光度测定；5 µg/100 mL为该方法的最低检测浓度，不是职业接触或诊断限值。

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乙酸乙酯—乙酸混合液破坏红细胞，使原卟啉溶出；盐酸再萃取游离原卟啉，依据其在激发光403 nm、发射光605 nm处的荧光强度定量。

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用930型荧光光度计和10 mm荧光比色杯；另需旋涡混合器、离心机、十万分之一天平、1/2/5/10 mL刻度吸量管、血红蛋白吸管、10 mL具塞试管、微型称量瓶、25/50 mL容量瓶及水泵。

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乙酸乙酯—乙酸混合液为4+1；盐酸萃取液0.5 mol/L；生理盐水氯化钠8.5 g/L；硅藻土生理盐水悬浮液25 g/L。

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储备液称1.25 mg原卟啉，以约2.5 mL浓盐酸溶解并定容25 mL，1 mL含50 µg；如用钠盐或二甲基酯，分别称1.35 mg和1.28 mg。应用液取储备液0.1 mL，用乙酸乙酯—乙酸混合液稀释并定容50 mL，1 mL含0.1 µg。

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取末梢血20 µL，立即注入含0.1 mL生理盐水的具塞试管并混匀；置冰瓶运送，在4°C冰箱保存。

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按6.1选42#（581光电比色计滤光片，420 nm）作激发滤光片，55#（550±10 nm）作荧光滤光片；这属于仪器操作条件，不应与原理段403/605 nm荧光峰混同。

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0～5号管均加0.1 mL生理盐水；原卟啉应用液依次为0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mL，乙酸乙酯—乙酸混合液相应为1.0、0.9、0.7、0.5、0.3、0 mL；FEP含量为0、0.01、0.03、0.05、0.07、0.10 µg。

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混匀后每管加0.15 mL 2.5%硅藻土悬浮液及3 mL混合液；旋涡混合10～15 s或振荡30 s，2000 r/min离心15 min；上清加4 mL 0.5 mol/L盐酸，旋涡20～30 s或振荡3 min，分层后用水泵或毛细吸管吸去上层有机溶剂，取下层盐酸液，以零管为参比读荧光强度。

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血样摇匀后加入1.0 mL乙酸乙酯—乙酸混合液，按6.2.2和6.2.3处理，由标准曲线读取FEP含量；测定前后及每测定10个样品后各做一次质控样。

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原图公式为X=(m/V)×1000；X单位µg/L，m为曲线查出的血样FEP量（µg），V为分析时取血样体积（mL），1000用于mL至L换算。

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原图8.1给出测定范围0.001～0.1 µg FEP/20 µL；批间CV 4.3%～7.0%、批内CV 2.4%～5.3%（FEP 0.01～0.1 µg，n=6）；血样加标平均回收率96.6%（加标0.03、0.05、0.07 µg，n=6）。均为方法性能。

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说明8.2列盐酸0.5 mol/L、乙酸乙酯—乙酸4+1、硅藻土悬浮液0.15 mL；振摇5 min可改旋涡混合20～30 s，全过程在30 min内完成。

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原文比较96个样本，相关系数r=0.9796，t_r=47.02、p<0.001；当FEP低于20 µg/100 mL时，荧光分光光度法灵敏度更高。原文指出接触者一般FEP>50 µg/100 mL时本法监测不受影响；这不是健康判定阈值。

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4.8允许标准血样、接触者混合血样或加标血样。8.5指出标准血样可考察准确度与精密度；接触者血样或加标血样则考察精密度。

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说明8.4记录本法可行性与检测效果验证，指出FEP值与空气中铅浓度呈现剂量反应关系。该方法学观察不能直接替代个体诊断或职业接触限值。

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试剂除另有说明外为分析纯；实验用水为蒸馏水或同等纯度去离子水，盐酸ρ20=1.19 g/mL。

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